服务介绍

基于CHO/HEK293 等哺乳动物细胞表达系统，通过瞬时表达系统可以实现抗体快速、高效、高产量的表达。安升达可以提供从杂交瘤测序、免疫组库测序、单B细胞测序到基因合成、载体构建、细胞转染、蛋白表达及纯化一站式解决方案。

 

服务流程

 

▶ 杂交瘤测序

安升达提供基于不同测序平台的杂交瘤测序技术方案：

基于高通量测序平台的杂交瘤抗体基因谱测序（HybSeq-HTTM），可对多个样本进行批量的扩增可变区、测序以及下游分析，大大提高了抗体测序通量和准确性，降低成本。 基于传统的Sanger平台的杂交瘤细胞抗体基因测序（HybSeqTM），可快速检测抗体基因全长序列。

服务优势

 

▶ 免疫组库测序

B细胞抗原受体(BCR)和T细胞抗原受体(TCR)通过V(D)J重组而产生的巨大多样性是适应性免疫系统的关键。安升达利用5’RACE技术特异性扩增包含CDR的可变区序列，结合高通量测序及生物信息学分析可以全面评估免疫组库的多样性。

利用免疫组库测序可获取以下信息：

•  个体内抗体VDJ序列信息及对应丰度信息
•  可变区CDR1/CDR2/CDR3核酸及氨基酸信息
•  组成可变区的抗体VDJ基因信息
• 不同时间维度下，抗体序列及丰度的变化

服务优势

▶ 单B细胞抗体基因测序

单B细胞抗体技术是一种先进的抗体制备方法，它利用单个B细胞只产生一种特异性抗体的特性，从免疫动物组织或外周血中分离出特异性B细胞，并通过单细胞PCR技术扩增重链可变区和轻链可变区DNA序列，最终在哺乳动物细胞内表达获得具有生物活性的单克隆抗体。

金唯智可以提供基于10x Genomics平台的高通量平台以及96孔的单B细胞测序，技术流程如下：

▶ 抗体文库多样性测序

采用高通量测序技术对抗体文库进行测序，可以全面揭示原始文库质量和淘选前后抗体文库基因组成的变化，获得准确的抗原特异性抗体序列。

基于待测Vector中不同长度的抗体序列，金唯智可以提供基于illumina和PacBio平台的抗体文库多样性测序服务：

• illumina PE300测序——分别扩增VH和VL序列，并进行单独测序获取各自的丰度信
• PacBio测序——能够实现10Kb以上的长度长优势直接对扩增产物进行测序，HiFi reads质量可以实现99.9%准确度；同扩增VH和VL，获得重链和轻链全长可变区序列及配对信息

分析内容

服务优势

•  使用经过优化验证的实验方法，最.大程度避免扩增偏好性
•  配合PacBio测序技术，提供重轻链完成序列和配对信息
•  基于定制化的生信分析流程，提供多角度的抗体文库数据挖掘信息
•  最快15BD实验报告服务，加快抗体发现速度

 

▶ 基因合成

抗体可变区的基因序列可以通过杂交瘤测序或免疫组库测序等方法得到，之后通过构建表达载体和转染哺乳动物细胞可以实现抗体重组蛋白的表达。基于10 多年的基因合成经验，安升达可以提供优质快速的基因合成服务，同时可以针对GC 含量、剪切位点、限制性内切酶位点、重复序列以及信号肽等进行密码子优化，以确保抗体基因的最.优化。

技术流程

 

▶ 载体构建

安升达构建了含有抗体恒定区的IgG 抗体表达载体，针对启动子、信号肽和载体元件的排列都进行了相关优化，确保抗体蛋白的高效表达。此外，安升达专业的超螺旋载体能够大大提高转染效率。

 

▶ 抗体文库合成

安升达提供的基因突变文库服务，可根据要求仅突变指定的氨基酸或核苷酸序列，同时保证文库的容量、多样性和完整性。这种在体外对分子改造与优化的技术，为蛋白质性质、结构与功能的研究提供了强有力的支持。

服务流程

*多样性、正确率和比例具体参数依据实际序列而定，详情请咨询项目管理。

 

▶ 抗体表达

目前蛋白表达有大肠杆菌、酵母、昆虫、哺乳动物细胞等多种表达系统。其中哺乳动物细胞表达系统能够为重组人源蛋白提供最接近于天然状态的翻译后修饰，使目的蛋白具备功能活性所必须的空间结构和修饰。安升达专注提供CHO/HEK293 等哺乳动物细胞的瞬时表达服务，保证重组蛋白的快速高效表达。

抗体表达一站式服务流程

抗体表达案例

 

服务周期

 

服务优势
项目类型：从免疫组库测序到抗体蛋白表达
项目描述：根据免疫组库分析结果，确认合成 13 条重链可变区，19 条轻链可变区，构建 IgG 抗体；进行200+ 组合的小量蛋白表达测试。
项目描述：根据杂交瘤测序可变区序列结果，构建IgG 抗体表达载体；进行 30ml 体系蛋白表达及纯化。蛋白纯度大于 95%。

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