1.2 检验方法

 ①外周单个核细胞分离：在采集肝素抗凝血之后，加入等量的Ficoll分离液，离心20 min，取上层血浆存入-70℃冰箱中保存。将中间层细胞吸出，以氯化钠溶液(0.9%)进行冲洗，离心10分钟，留细胞沉淀。

 ②淋巴细胞亚群检测：采集50 μL肝素抗凝血，加入荧光标记体，然后混合均匀，于室温下避光30 min，加入450 μL溶血剂，混合均匀之后，静止20 min，进行流式细胞仪检测。

 ③细胞因子基因表达检测：将TRIzol1mL加入外周血单个细胞沉淀，于室温条件下保存5 min，加入氯仿200 μL，剧烈摇晃20 s，静止5 min。取上层置入Eppendorf管，再加入异丙醇500 μL，混合均匀，于室温条件下静止10 min，离心10 min。取上清液，以乙醇(70%)洗一次，离心5 min，在沉淀晾干后，加入3 μLDEPC水，检测260 nm与280 nmA值。

 1.3 观察指标

 以SPSS 22.0软件对所得数据进行处理分析，对计数资料以χ2检验，以例数百分比的形式表示，对计量资料以t检验，以(x±s)的形式表示，当P 上一页 第 1 2 页
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