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[摘要] 目的 以基因工程酵母表达的胞内D—氨基酸氧化酶(DDAO)为原料，通过破细胞，分离纯化DSAO。方法 采用机械研磨，反复冻溶，超声波等多种方法破细胞，获得粗酶液，硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后，经DEAE Sphadex A—50，DEAE—DE5'2，Q—sepharose等离子交换柱进行第一步分离，获得的含酶粗品，再经SephacrylS-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO。结果 超声波破壁为最佳的破壁方法，得到的每毫升酶液所含的酶活力是其他破壁方法的两倍以上，最高达到12 000U/mL。两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO，50%硫酸铵沉淀酶回收率可达85%以上。用Q—sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化，酶活力回收率最高可达90%，SDS-PACE显示单一蛋白条带。结论 本实验方法能得到电泳纯的DAAO，总回收率约为40%。
[关键词] D—氨基酸氧化酶； 分离； 纯化
[中国图书馆分类法分类号] Q814
http://www.100md.com/html/paper/0257-8131/2005/01/19.htm
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