第1页参见附件(382KB，4页)。
[摘要]目的 探讨基因重组人生长激素(rhGH)及联合化疗(氟尿嘧啶，5.FU)对荷瘤小鼠的影响。 方法 将80只615近交系小鼠以小鼠前胃癌细胞(MFC)经脾接种建立肝转移模型。然后随机分为两大组，第一大组48只，分4组，每组12只，接种术后2周进行治疗。分别为对照组(NS组):每日皮下、腹腔分别注射生理盐水(NS)0.2、0.5ml;生长激素组(GH组):皮下注射rhGH2IU·kg -1 ·d -1 ;单纯化疗组(5.FU组):腹腔注射5.FU20mg·kg -1 ·d -1 ;联合组:皮下注射2IU·kg -1 ·d -1 和腹腔注射5.FU20mg·kg -1 ·d -1 。连续用药1周。另外32只编为第二大组，分4组，每组8只，分组及治疗方法同前。术后28d，将第一大组小鼠处死，观察肝转移情况;第二大组待其自然死亡或观察满70d后处死，记录生存期。结果 术后28d，与对照组相比较，GH组小鼠体重增加，但无统计学意义(P>0.05)，联合组小鼠体重明显增加(P0.05)，但平均生存时间明显延长(P 1 材料和方法
1.1 实验动物
615近交系小鼠80只，6～8周龄，体重18～22g，雌雄各半。
1.2 前胃癌细胞(MFC)悬液的制备
MFC细胞购自上海细胞生物研究所。MFC细胞悬于含体积分数为0.1的胎牛血清和DMEM培养液(含双抗:青霉素100U·ml -1和链霉素100U·ml -1 )中，37℃、体积分数为0.05的CO 2 培养箱培养。该细胞贴壁生长，呈多角形。实验时取对数生长期细胞，用胰蛋白酶消化后机械吹打成单细胞悬液，用适量生理盐水配制成细胞浓度为1×10 7 ml -1 的悬液，0.4%台盼蓝测定细胞活力在95%以上。
1.3 动物分组及化疗方法
随机将48只术后小鼠编为第一大组，分为4组，每组12只，分别为对照组(NS组)、生长激素组(GH组)、单纯化疗组(5.FU组)、联合组(GH.5.FU)。用1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，开腹，将细胞悬液0.2ml(2×10 6 )注入脾被膜下，苏醒后自由进水饮食。术后14d给予相应的治疗。NS组:每日皮下、腹腔分别注射生理盐水(NS)0.2、0.5ml;GH组:皮下注射rhGH(每支10IU)2IU·kg -1 ·d -1 ;5.FU组:腹腔注射5.FU20mg·kg -1 ·d -1 ;联合组:皮下注射rhGH2IU·kg -1 ·d -1 ，腹腔注射5.FU20mg·kg -1 ·d -1 。连续用药7d。将另外32只术后小鼠编为第二大组，随机分为4组，每组8只，分组及治疗方法同前。
1.4 观察及检测方法
第一大组小鼠每周称重。接种术后28d，将第一大组小鼠剪尾取血，于显微镜下计数白细胞数量。然后处死，观察肝脏肿瘤生长情况，切取有异常结节的全肝称重，并按下式计算肝脏指数:肝脏指数=肝脏重量.体重×100%。将部分异常肝脾结节用10%甲醛固定，HE染色，行病理组织学观察。将第二大组小鼠待其自然死亡或观察满70d后处死，观察肝脏肿瘤生长情况。将有肝转移结节的小鼠记录生存期。
1.5 统计方法
应用SPSS软件进行资料处理。体重、肝重结果采用方差分析，肝转移率经χ2 检验及Fisher确切概率计算法分析，生存期分析用秩和检验。取α=0.05为检验水准。
2 结果
2.1 各组小鼠前胃癌肝转移率
第一大组分别为:NS组70.0%(10.12)，GH组83.3%(10.12)，5.FU组91.7%(11.12)，联合组91.7%(11.12)。第二大组分别为:NS组87.5%(7.8)，GH组100%(8.8)，5.FU组87.5%(7.8)，联合组100%(8.8)。各组间转移率经χ 2 检验、Fisher确切概率计算法得P>0.05，无统计学差异。在各实验组中转移瘤的数目、大小等情况均不同，对照组和GH组部分小鼠的肝脏表面结节相互融合，形成大的转移瘤，难以计数;5.FU组和联合组转移结节数相对较少。肝脾异常结节的病理组织学检查提示为低分化鳞癌。
2.2 体重变化
各组小鼠不同时间的体重变化见表1。表1提示，手术前各组小鼠体重无显著性差异，治疗开始时各组小鼠体重均较术前增加，试验结束时联合组小鼠体重较对照组明显增加(P0.05)。
表1 手术前后各组小鼠体重变化(略)
注:各组未发生肝转移小鼠已从实验中排除。
2.3 各组肝脏重量、肝脏指数与白细胞数的变化
见表2。表2结果表明，与NS组相比较，GH组的小鼠肝重和肝脏指数有所增加，但无统计学差异(P>0.05)，5.FU组及联合组的小鼠肝重和肝脏指数均明显下降，差异有统计学意义(P0.05)。白细胞计数各组相比无统计学差异(P>0.05)。
表2 肝脏重量及肝脏指数变化(略)
2.4 生存期的变化
第二大组荷瘤小鼠肝转移瘤情况与第一大组大致相同，生存时间分别为NS组(33.1±3.4)d，GH组(34.0±3.8)d;5.FU组(41.3±4.4)d;联合组(52.4±4.9)d。与NS组比较，GH组生存时间稍延长，但无统计学意义(P>0.05)，5.FU组和联合组明显延长(P 3 讨论
重组人生长激素可逆转蛋白质分解代谢、加速创伤愈合、提高手术耐受性，具有增加机体免疫功能和NK细胞活性等作用。但由于对其潜在的致癌性及促进肿瘤生长作用的担心，使其在癌症治疗中的应用受到限制。在体外实验中，Harrison等[3] 发现rhGH可显著促进体外培养的胰腺癌细胞生长，但大多数体内研究并没发现GH有明显刺激肿瘤生长的作用[2] 。有学者认为，当肿瘤完全切除并辅以抗肿瘤药物治疗时，可以对癌症病人进行短期的营养支持，不增加肿瘤复发的危险性，且无任何严重的副作用，可以用于晚期肿瘤患者的姑息治疗[4] 。
本研究试验结束时GH组小鼠体重比对照组增加，联合组小鼠体重也比5.FU组有所增加，但均无统计学差异(P>0.05)，从而并没有体现出生长激素对恶性肿瘤导致的体重下降的扭转作用。本研究未出现显著性结果，可能与治疗时间较短和样本含量较小有关。联合组小鼠体重比对照组显著增加(P0.05)，但是生存时间明显延长(P [参考文献]
[1]WANG D，PATIL S，LI W，et al.Activation of TGF alpha auto-crine loop is downstream of IGF.1receptor activation during mito-genesis in growth factor dependent human colon carcinoma cells[J].Oncogene，2002，21(18):2785.2596.
[2]祁小平，黎介寿，陈彻.人生长激素诱导体外培养的大肠癌细胞株细胞周期动力学变化[J].南京大学学报(自然科学版)，2000，36，(5):598.600.
[3]HARRISON L E，DLUMBERG D，BERMAN R，et al.Effect of human growth hormone on human pancreatic carcimona growth pro-tein and cell cycle kinetics[J].J Surg Res，1996，61(2):317.322.
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[6]段体德，温先敏，刘德权，等.生长激素联合顺铂及丝裂霉素对荷前胃癌小鼠的抑瘤作用研究[J].云南医药，2003，24(4):261.263
[作者简介] 王琳(1972-)，男，山西代县人，主治医师，在读硕士研究生。
(东南大学附属中大医院肿瘤科，江苏南京 210009)
http://www.100md.com/html/paper/1671-7562/2004/04/05.htm
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