第1页参见附件(269KB，3页)。
[摘要]目的 监测冠心病患者血浆中载脂蛋白M(ApoM)的水平，了解ApoM与其他脂蛋白或载脂蛋白的关系。 方法 应用Dot.Blotting技术检测70例冠心病患者及85例健康志愿者血浆中ApoM的水平，酶法及比浊法检测冠心病患者血浆中载脂蛋白AI(ApoAI)、载脂蛋白B(ApoB)、脂蛋白a(Lpa)、总三酸甘油酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL.C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL.C)以及空腹血糖(Glu);比较冠心病患者和健康志愿者血浆中ApoM的水平，对ApoM与其他脂蛋白的关系进行相关性分析。 结果 冠心病患者血浆中ApoM的水平为(3.355±0.1222)ODu·mm -2 ，明显高于健康志愿者(2.097±0.05988)ODu·mm -2 (P 1 对象与方法
1.1 研究对象
冠心病组:2000年3月至2003年3月住本院经冠脉造影确诊的冠心病患者70例，其中男47例，女23例，年龄43～81岁，平均(65.28±10.66)岁，合并糖尿病的患者除外。健康志愿者组:85名汉族健康输血员，其中男56例，女29例，年龄18～55岁，平均(29.34±9.54)岁，无冠心病心绞痛及高血压病史，血生化检查排除高脂血症，心电图未发现心肌缺血性改变。
1.2 标本和仪器
自冠心病患者及健康输血员空腹肘正中静脉采血5ml，EDTA抗凝，离心分离出血浆于-70℃保存。兔抗人ApoM多克隆抗体(一抗，由瑞典隆德大学临床化学研究所惠赠)，碱性磷酸酶标记的羊抗兔抗体(二抗，购自丹麦DAKO公司)，NBT/BCIP显色基质(购自上海晶美生物工程有限公司)，Hybond.C膜(购自Amer-sham Lifescience)，Beckman LX.420自动生化分析仪(Beckman公司)，凝胶成像分析仪及Quantity One软件(BIO.RAD)。
1.3 Dot.Blotting检测血浆ApoM
室温融化冰冻血浆，取3μl点样于Hybond.C膜，室温下干燥，以含BSA及Tween的TBS(TBS BSA Tween20=10034)4℃封闭膜过夜，加入兔抗人ApoM多克隆抗体(TBS一抗=5001)，室温2h后，TBS洗膜4次，每次10min，加入碱性磷酸酶标记的羊抗兔的二抗(TBS二抗=20001)室温2h后，依次以TBS、TBS+2%Tween20、TBS+2%Tween20、TBS洗膜，每次10min，加入显色剂NCBT/BCIP显色，以凝胶成像仪及Protein Quantity I软件分析。分析结果以ODu·mm -2 (单位面积的吸光度)表 示。为避免误差，所有的标本均于同一反应体系中进行，每份血浆重复检查3次，取3次的平均分析值为最终检测结果。
1.4 总三酸甘油酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL.C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL.C)、载脂蛋白AI(ApoAI)、载脂蛋白B(ApoB)及空腹血糖检测
低温保存的血浆一次性冻融，酶法检测TG、TC、HDL.C、LDL.C及空腹血糖，多点定标比浊法检测ApoAI、ApoB。所有标本由Beckman LX.420自动分析仪一次性检测。
1.5 统计学处理
所有数据均以x±s表示，用非配对t检验比较冠心病患者与健康志愿者血浆ApoM水平的差异，用Pearson相关分析法检验ApoM与其他血脂参数的相关关系，P 2 结果
2.1 冠心病患者与健康志愿者血浆ApoM的比较
用Dot.Blotting技术检测冠心病患者与健康志愿者血浆ApoM，结果显示:健康志愿者组血浆ApoM水平[(2.097±0.05988)ODu·mm -2 )]低于冠心病组血浆ApoM水平[(3.355±0.1222)ODu·mm -2 ](t=9.745，P 3 讨论
载脂蛋白是脂蛋白的重要组成成分，迄今发现的载脂蛋白已有10余种，它们通过不同的途径调节体内的脂质代谢，如ApoAⅠ是通过激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)而参与HDL中胆固醇的逆向转运，ApoCⅡ是通过激活脂蛋白酯酶(LPL)的活性而影响体内三酸甘油酯的代谢。ApoB、ApoE是通过受体介导途径参与体内的乳糜微粒残体及中间密度脂蛋白(IDL)在肝脏的代谢 [1，2] 。载脂蛋白所介导的血脂异常在冠心病的发生发展中起着重要作用。大规模的流行病学研究表明，ApoAI水平降低，血浆总胆固醇升高、低密度脂蛋白胆固醇升高，高血压、糖尿病、吸烟、酗酒等与冠心病的发生发展明显相关，而高密度脂蛋白参与了机体胆固醇的逆向转运，与冠心病的发病率呈明显负相关 [3] 。
ApoM是一种新近发现的载脂蛋白，其基因位于6号染色体的主要组织相容性复合物Ⅲ区，特异性地表达于肝实质细胞和肾脏远曲小管上皮细胞 [4] 。ApoM主要存在于HDL中，少量存在于LDL及富三酸甘油脂蛋白(TGRLP)中，去脂蛋白血浆中ApoM仅痕量存在，肝脏合成的ApoM可能参与HDL的合成。以前的研究表明，低水平ApoAI系冠心病的独立危险因子 [1，5] 。本研究检测了70名冠心病患者血浆ApoM水平并与85名健康志愿者比较，显示冠心病患者血浆ApoM水平明显高于健康志愿者，且与血浆ApoAI呈明显的负相关，提示ApoM可能与冠心病的发生有一定关系。
HDL是机体胆固醇逆向转运的主要形式，其主要载脂蛋白为ApoAI、ApoC、ApoE及少量ApoM。ApoAI是通过激活LCAT参与胆固醇的代谢。LDL来源于血浆VLDL，其主载脂蛋白为ApoB100，LDL通过LDL受体介导途径及巨噬细胞等非受体介导途径清除。以前的研究发现高脂饮食后TGRLP中ApoM明显增高，提示ApoM可能参与脂质的代谢与调节 [6] 。本研究通过对健康志愿者血浆中ApoM与HDL.C及HDL.C/ApoAI的相关性研究发现，健康志愿者血浆中ApoM与HDL.C及HDL.C/ApoAI呈明显的正相关。而冠心病病人血浆中ApoM与ApoAI、LDL.C及LDL.C/ApoB呈明显的负相关，提示ApoM可能参与体内的胆固醇代谢，但具体的调节机制尚有 待进一步研究。
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[5]FRANCIS M C，FRANCIS J J.Coronary artery disease in pa-tients at low risk.apolipoprotein AI as an independent risk fac-tor[J].Atherosclerosis，2001，155:165.170.
[6]XU N，DAHLBACK B.A novel human apolipoprotein(ApoM)[J].J Biol Chem，1999，274:31286.31290.
[作者简介] 焦国庆(1970-)，男，江苏泰州人，主治医师。
(苏州大学附属第三医院胸外科，江苏常州 213003;Department of Clinical Chemistry，Institute of Laboratory Medicine，University Hospital of Lund，S.22185Lund，Sweden)
http://www.100md.com/html/paper/1671-7562/2004/01/09.htm
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