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 参见附件(2009KB，4页)。

  1.3 疗效评估标准

 急性早幼粒细胞白血病CR和复发标准参见文献[3],极早期死亡为确诊5 d内死亡,早期死亡为确诊后6～15 d内死亡。

 1.4 实验主要试剂和材料

 FITC-(或PE-)标记的鼠抗人CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD10、CD13、CD14、CD15、CD16、CD19、CD20、CD22、CD33、CD34、CD45、CD56、CD34、HLA-DR等单抗(mAb)及同型对照购自美国BD公司。流式细胞仪(FACScabilur型)为BD公司产品。TRIzol总RNA提取液购自美国Gibco BRL公司,逆转录酶M-MLV购自美国Promega公司,Taq DNA聚合酶购自大连宝生物工程有限公司。

 1.5 免疫表型分析

 采用流式细胞术直接免疫荧光标记法,以PE或FITC标记的各种单抗检测EDTA抗凝APL骨髓单个核细胞表面淋系抗原CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD10、CD19、CD20、CD22,髓系抗原CD13、CD14、CD15、CD33,干细胞抗原CD34、HLA-DR和NK细胞CD16、CD56等的表达。采用Cellquest软件采集分析数据,每次至少分析1×104个细胞。以大于20%的白血病细胞表达荧光定为阳性。对于CD34抗原,根据文献[4],将大于10%的白血病细胞表达荧光,定为CD34+。

 1.6 RT-PCR检测PML-RARα融合基因表达

 常规抽取患者骨髓液2～5 ml,肝素抗凝,用淋巴细胞分离液(Ficoll分离液)分离单个核细胞,计数(5～10)×106细胞加TRIzol总RNA提取液1 ml,TRIzol一步法提取骨髓单个核细胞总RNA,紫外分光光度仪测定OD260、OD280吸光值,计算RNA含量。逆转录反应体积为40 μl,包括标本RNA 2 μg,六随机引物100 ng,5×逆转录buffer 5 μl,10 mmol L-1 dNTP 1.25 μl,RNAsin 25 U,逆转录酶200 U。37 ℃ 45 min,95 ℃ 5 min,-20 ℃保存备用。参考文献[8]合成引物,ABI 9600 PCR扩增仪行多重RT-PCR检测PML/RARα融合基因不同亚型(BCR1、BCR2和BCR3),PCR产物溴乙锭染色,1.5%琼脂糖凝胶电泳成像观察结果。

 1.7 统计学处理

 采用SPSS 10.0统计软件,各组数据以±s表示,连续变量采用t检验或Mann-Whitney test各组数据间差异,离散变量采用卡方检验各组数据间差异。P
 http://www.100md.com/html/paper/1671-7562/2011/02/14-1.htm
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