[摘要]目的 通过优化玻璃珠破碎法的条件，制备最具活性的重组人CYP2C9酵母微粒体，从而为建立更加灵敏快捷的体外代谢筛选模型提供依据。方法 利用玻璃珠破碎的方法，制备重组人CYP2C9酵母微粒体。通过改变涡旋振荡次数和玻璃珠用量，优化制备微粒体的条件。用Lowry法测定微粒体中的蛋白含量，用CYP2C9的典型底物双氯芬酸与微粒体进行反应，以单位时间(h)内单位蛋白(mg/ml)所对应的双氯芬酸代谢物4-羟基双氯芬酸的生成量来确定微粒体的蛋白活性。结果 随着涡旋振荡次数和玻璃珠用量的增加，所制备微粒体蛋白的含量增加。当涡旋振荡次数为30次(每次涡旋振荡30 s，冷却60 s)，玻璃珠用量为0.75 g时，代谢物生成量和单位时间单位蛋白所对应代谢物生成量最大，分别为1.21 μg和0.06 μg/[(mg/ml)·h] ...... 第 1 2 3 4 5 页 下一页
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