参见附件。
2.3.3 验证试验 优选方案A3B2C3是正交表中没有的方案，尚需进一步试验予以验证。按处方比例，称取山茱萸15 g、牛膝15 g、车前子15 g、泽泻7.5 g等药材，总质量142.5 g，按方案A3B2C3的工艺条件重复试验3次。结果表明，3次重复试验的浸膏得率与马钱苷浸出量均接近或优于正交表中最好的5号试验方案，且马钱苷转移率均大于90%(见表5)。因此，可认为所选方案A3B2C3合理可行。
2.4 提取次数的考察
在上述正交试验优选工艺条件的基础上，进一步考察提取次数对浸出效果的影响。依上述方法称取药材，照优选工艺条件，加水浸泡1.5 h，加热回流提取3次，加水量分别为药材的8、6、6倍量，提取时间分别为2.0、1.5、1.5 h，收集合并第1、2次提取液，定容至1 000 mL，再收集第3次提取液，定容至1 000 mL，备用。取提取液适量，分别测定浸膏得率与马钱苷含量，结果第1、2次提取液的浸膏得率和马钱苷浸出量分别为32.71%和128.18 mg，而第3次分别为3.58%和9.22 mg，分别占总量的9.86%和6.71%。
3 讨论
本研究以浸膏得率和马钱苷浸出量为评价指标，采用正交试验对浸泡时间、加水量、提取时间3种工艺因素对浸出的影响进行了考察，并通过直观方析与方差分析确定了基于2次提取的最佳工艺条件。此优选工艺经3次重复试验验证，结果令人满意。在此基础上进一步考察了3次提取对浸出的影响，结果表明，第3次提取的意义不大，综合考虑生产成本和生产周期，认为提取次数以2次为佳。上述结果可为制订该制剂合理的生产工艺提供试验依据。
马钱苷为山茱萸中的主要有效成分，具有抗炎镇痛、抗菌及免疫调节等作用[2]，故选择其作为提取工艺优选的主要评价指标。另外，曾参照2010年版《中华人民共和国药典》(一部)山茱萸项下含量测定方法，采用高效液相色谱法，以乙腈-水(15∶85)为流动相对制剂中马钱苷进行测定，但发现马钱苷色谱峰与其他组分色谱峰不能有效分离。调节乙腈-水的配比，分离效果亦不理想，这可能是由于复方制剂中药味较多，成分较复杂所致。后经多次试验摸索，采用甲醇-0.05%磷酸水溶液(22∶78)[3]为流动相，达到良好的分离效果。 参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：26.
[2] 于森，王晓先，贾琳.山茱萸的药理作用研究进展[J].东南国防医药， 2010，12(7)：240-243.
[3] 王诚元.高效液相测定知柏地黄丸中马钱苷含量[J].湖南中医杂志， 2006，22(2)：82-83.
(收稿日期：2011-11-22，编辑：陈静)
