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 李子博 曾赵军 孙开胜 罗洁 长沙医学院医学检验系;中南大学生物科学与技术学院分子生物学研究中心;

 【摘要】目的:构建携带受Tet-On以及VEGF启动子双调控自杀基因HSVtk的重组腺相关病毒载体,研究其在乳腺癌细胞MCF-7中的可调控表达。方法:用PCR方法扩增VEGF启动子,将其插入pAAV/TRE/HSVtk/Tet-On中形成重组载体pAAV/VEGF/TRE/HSVtk/Tet-On质粒。进行病毒包装后得到了rAAV/VEGF/TRE/HSVtk/Tet-On重组腺相关病毒。用重组腺相关病毒感染乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺HBL-100细胞,用MTT法及RT-PCR检测在Dox诱导下,GCV对rAAV感染的MCF-7细胞和HBL-100细胞的杀伤作用以及HSVtk基因在MCF-7细胞内的表达情况。结果:在rAAV+Dox+GCV组,GCV对rAAV感染的MCF-7细胞的杀伤作用明显高于rAAV+Dox组,rAAV+Dox组以及HBL-100组,并且RT-PCR结果显示经Dox诱导HSVtk表达较明显。结论:成功构建了携带双调控自杀基因的重组腺相关病毒载体,该病毒载体能有效的感染乳腺癌细胞MCF-7,并能联合GCV治疗,抑制肿瘤细胞生长,而且具有靶向性。

 【关键词】 基因治疗 腺相关病毒 VEGF启动子 HSVtk基因 Tet-On

 【基金】湖南省教育厅基金资助项目(L07C151)

 【分类号】Q784

 前言自杀基因治疗是一种常用于肿瘤治疗的研究策略。单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSVtk)能在细胞内将无毒副作用的药物前药丙氧鸟苷(ganciclovior,GCV)转化为毒性产物,诱导靶细胞产生“自杀”效应,从而导致肿瘤细胞的死亡[1]。在基因治疗中,调节目的基因在宿主细胞中的表达以及提高
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  摘要目的：构建携带受Tet-On以及VEGF启动子双调控自杀基因HSVtk的重组腺相关病毒栽体，研究其在乳腺癌细胞MCF-7中的可调控表达。方法：用PCR方法扩增VEGF启动子，将其插入pAAV/TRE/HSVtk/Tet-On中形成重组栽体pAAV/VEGF/TRE/HSVtk/Tet-On质粒。进行病毒包装后得到了rAAV/VEGF/TRE/HSVtk/Tet-On重组腺相关病毒。用重组腺相关病毒感染乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺HBL-100细胞，用MTT法及RT-PCR检测在Dox诱导下，GCV对rAAV感染的MCF-7细胞和HBL-100细胞的杀伤作用以及HSVtk基因在MCF-7细胞内的表达情况。结果：在rAAV+Dox+GCV组，GcV对rAAV感染的MCF-7细胞的杀伤作用明显高于rAAV+Dox组，rAAV+Dox组以及HBL-100组，并且RT-PCR结果显示经Dox诱导HSVtk表达较明显。结论：成功构建了携带双调控自杀基因的重组腺相关病毒栽体。该病毒栽体能有效的感染乳腺癌细胞MCF-7，并能联合GCV治疗，抑制肿瘤细胞生长。而且具有靶向性。

 关键词：基因治疗；腺相关病毒；VEGF启动子；HSVtk基因；TenOn

 中图分类号：Q784 文献标识码：A 文章编号：1673—6273(2009)08—1424—04