第1页
 参见附件(2167KB，4页)。

 郑春丽 张燕飞 吴安娜 戴云杰 张晓键 柳建设 中南大学资源加工与生物工程学院;内蒙古科技大学生物与化学工程学院;东华大学环境学院;

 【摘要】嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)中APS还原酶是硫同化途径的一个关键酶,其对硫酸盐的还原及硫化物的氧化具有重要调节作用。本文以A.ferrooxidans ATCC23270基因组为模板,通过PCR扩增得到编码APS还原酶的cysH基因,与原核表达载体pLM1构建重组体,转化入大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)DH5α中,测序正确后,加IPTG诱导表达,用一步亲和层析法纯化出浓度和纯度都较高的APS还原酶。由蛋白颜色和紫外分析,确定其含有一个[Fe4S4]簇作为活性中心。表达产物进行SDS-PAGE分析,证实分子量为28kD。酶活测定表明其具有将APS还原为亚硫酸盐跟AMP的功能。

 【关键词】 嗜酸氧化亚铁硫杆菌 APS还原酶 cysH 克隆 表达 纯化

 【基金】国家973计划“微生物冶金的基础研究”项目(2004CB619201) 国家自然科学基金创新研究群体资助项目(50321402) 全国优秀博士学位论文作者专项资金资助项目(200549) 国家自然科学基金项目(50874032)

 【分类号】Q78

 前言嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)是典型的化能自养菌,属于革兰氏阴性细菌,好氧嗜酸,由于能生长在元素硫和硫化物矿物上,因而成为生物湿法冶金中最有应用价值的一个种。目前已有不少国家应用它提取铜、铀、金等已获得工业生产,另外在煤脱硫、混合精矿
------
  摘要：嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)中APS还原酶是硫同化途径的一个关键酶，其对硫酸盐的还原及硫化物的氧化具有重要调节作用。本文以A.ferrooxidavis ATCC23270基因组为模板，通过PCR扩增得到编码APS还原酶的cysH基因，与原核表达载体pLM1构建重组体，转化入大肠杆菌(Escherichia coli，E.coli)DH5α中，测序正确后，加IPTG诱导表达，用一步亲和层析法纯化出浓度和纯度都较高的APS还原酶。由蛋白颜色和紫外分析，确定其含有一个[Fe4s4]簇作为活性中心。表达产物进行SDS-PAGE分析，证实分子量为28kD。酶活测定表明其具有将APS还原为亚硫酸盐跟AMP的功能。

 关键词：嗜酸氧化亚铁硫杆菌；APS还原酶；cysH；克隆；表达；纯化

 中图分类号：Q939.99 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)05-812-03