在基因组编辑的世界里，CRISPR/Cas9代表着王牌。它为研究人员带来了一种简单的方法，将核酸酶、转录调控因子或荧光蛋白送到基因组中的任何地址。这种方法已改变了疾病研究、基因调控、药物开发等。
不过，研究人员首先需要将Cas9蛋白和向导RNA（gRNA）导入他们感兴趣的细胞。事实证明，他们有几种选择。
各花入各眼
在CRISPR/Cas9系统中，研究人员可以自由地选择转染DNA表达载体、mRNA和gRNA，或蛋白质。据赛默飞世尔转染部门的研发主管Xavier de Mollerat du Jeu介绍，这具体取决于研究人员需要多少蛋白，以及需要多长时间。
他解释道，DNA表达载体往往在几天内产生高水平表达的蛋白质和RNA，但有延迟，因为基因必须被转录和翻译。对于Cas9 mRNA和gRNA，编辑更快发生，因为不需要转录，但在转录本降解之后会迅速下降。蛋白当然是最快的，因为不需要转录或翻译。与RNA一样，蛋白快速周转。
Bio-Rad的全球产品经理Veronika Kortisova认为，对于Cas9而言，快速周转其实是件好事，因为与长期表达相比脱靶事件更少。“人们认为，当系统进去之后，它开展编辑并离开细胞，这样毒性较低。对于质粒，持续的蛋白表达有时会造成负面影响。”
不过，Mirus Bio的研发负责人Laura Juckem认为，这也有缺点。最明显的是，蛋白和mRNA需要实验室额外的纯化工作，成本也比质粒DNA更高。当然，研究人员也能从一些供应商处购买现成的Cas9蛋白或mRNA，比如GE Healthcare Dharmacon、MilliporeSigma、美天旎、赛默飞世尔和NEB。
转染选择多
研究人员在导入核酸时通常有两种选择：转染试剂和电穿孔。转染试剂大多为脂质体、聚合物等。一些试剂是为特定类型的目标而设计的，比如Bio-Rad的siLentFect适用于siRNA，赛默飞的Lipofectamine MessengerMAX适用于mRNA，而Promega的FuGENE专为DNA而优化。其他的转染试剂，如赛默飞的Lipofectamine 3000和Bio-Rad的TransFectin试剂，则支持更广泛的应用。
电穿孔是在细胞膜上打了一个孔，如果分子能穿过这个缺口，则它就能进入细胞。“在导入CRISPR/Cas9工具时，Nucleofection非常高效，”Lonza的高级产品经理Andrea Toell谈道。Lonza的Nucleofection平台实现了各种细胞的电穿孔，包括难以转染的原代细胞。Toell还表示，Lonza提供了各种立即可用的操作方案，这样客户可立即启动他们的实验，而不需要优化条件。同样地，Bio-Rad的GenePulser Xcell和赛默飞的Neon系统也有类似的数据库。
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