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细胞的代数及管理方法

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人阅读 发布时间:2023-06-05 08:51

           细胞的代数是指细胞传代的次数,小伙伴们在培养细胞时,经常会遇到passage number 和 population doubling number 这两个数值到底有什么区别呢?我们应当如何管理有限传代细胞呢?

Passage number是什么意思?
         细胞培养中的传代数(passage number)是记录该细胞被传代的次数,即收取并重新分散到多个“子”细胞培养瓶中。常规定义是细胞用胰酶消化一次,细胞代数就增加一代。
         那么“刚刚复苏的细胞是否为新传的一代呢?”这是经常会被问到的问题。当细胞被用胰酶消化、冻存,随后又解冻重新复苏时,这一个过程为一代。因此,将细胞转移到另一个培养瓶,在重新接种时应算增加其传代数,但在冻存时就不要增加传代数了。

Population doubling number是什么意思?
         倍增次数(population doubling (PD or pd) number)是细胞数量翻倍的次数。这对于寿命有限的细胞系很有意义。例如,当传代的细胞分裂比例为1:2时,传代数与PD数相等;传代的细胞分裂比例为1:4时,传代数等于2 PD数,以此类推。

为什么passage number一般只被认为是一个参考值?
         传代次没有考虑细胞的接种密度或随后收获的细胞数量,因此无法给出细胞数量翻倍的实际数字。例如,一个人把代次为15的细胞按1:4进行传代,而另一个则按1:10的比例传代相同的细胞。两者在新的培养瓶都标上相同的代次数,即16代。然而,传代比例小的细胞批次会经历更多轮的细胞分裂。目前没有直接的实验去确定细胞培养的传代数或PD数。所以每次传代都应该做好传代比例的记录。

倍增次数有什么意义?
         在细胞培养中,PD数可以反应增殖的程度。正常细胞通常只能分裂有限的代次,随后就会因遗传而停止分裂,丧失增殖能力,这种细胞被称为有限细胞系(例如:原代细胞、干细胞)。而一些细胞系通过转化变成了永生化细胞系,这一过程可能是自然发生的病变,也可能是经过化学或病毒诱导使有限的细胞系转化获得无限分裂的能力后,就成为无限细胞系(例如:肿瘤细胞和永生化细胞)。

常见的有限传代细胞

         
         MRC-5  HFL1 CCD-18Co  CCD-841CoN CCD-1095Sk IMR-90
       如需以上细胞详细资料,欢迎随时WHELAB咨询。

细胞代次怎么计算?
           对于有限传代细胞代次的计算,我们可以采用记录细胞群体倍增数(PDL)的方法。公式如下:
          PDL =X+3.322(log Y – log I)
          X为传代前代次,I 为细胞接种前细胞数,Y 为培养后细胞总数。
         注意:
        (1) 常规培养时,1:2传代代次+1,1:3传代代次+1.5;
        (2) 扩增培养记录接种细胞量以及收获细胞量,根据公式计算代次。

细胞代数如何管理呢?
         细胞的代数管理,共有以下三个步骤:
        (1) 细胞引进:当我们得到一个新的细胞,就要记录该细胞的初始代次。
        (2) 扩增培养:对细胞进行扩增培养时,可以根据传代过程记录代次。
        (3) 分级冻存:在进行细胞冻存时,可以分不同级别冻存,对细胞的代次进行控制。

WheLab细胞代数是多少?
         官网和说明书未加特殊标注的细胞,一般是3~4代,这个代数是指在我实验室扩增的代数。

间充质干细胞做诱导分化用多少代?
         一般间充质干细胞建议使用P10代以内,做诱导分化实验一般是P4-P7代。

做细胞实验是不是越小代次越好?
           当使用原代细胞或间充质干细胞实验时,需要考虑代数问题,如果使用永生化细胞或者癌细胞一般可以不用考虑细胞的代数问题,有STR鉴定结果即可。 具体应根据自己的实验综合考量。


 

 
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