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  【摘要】 目的: 通过分析不同病期血液中淋巴细胞cyclinD1、P16、P27的表达情况，探索这些指标在癌症发生发展变化中的临床意义。方法: 回顾性分析86例经病理诊断的癌症患者的血液学cyclinD1、P16、P27的表达情况，比较稳定和进展组间cyclinD1、P16、P27表达的差异性(其中52例稳定、34例进展)，计量资料以(X±S)表示，采用两独立样本t检验，计数资料采用卡方检验，p 0.05)，外周血淋巴细胞cyclinD1、P16的表达进展组均显著高于稳定组(p 0.05)；Logistic回归分析，cyclinD1对病情的预测有统计学意义(p[1]。本研究试图从细胞周期的失控调节方面，寻找能较准确预测肿瘤病人病期及判断预后情况的指标。

 1 材料与方法

 1.1 临床资料:收集2008年~2009年间入住我科治疗的86例经病理诊断的癌症患者，其中52例为经标准抗肿瘤治疗4个周期以上缓解后一直稳定1年未见癌转移的患者，男25例,女27例，中位年龄60岁(41~76岁)；另34例为进展期的癌症患者，其中男23例，女11例，中位年龄62岁(30~82岁)。所有患者均排除影响外周血淋巴细胞水平的疾病(如炎症、过敏、自身免疫疾病等)。

 1.2 分组:稳定组：经标准治疗至少4个周期的癌症患者，病情持续稳定1年未发生转移。按实体瘤疗效评定。

 进展组：初次发病；或出现新的转移灶；和/或有可观察肿块增大>25%，肿瘤标志物任何一项增高(+++)以上并持续3个月以上者。

 1.3 主要试剂和仪器:鼠抗人cyclinD1、P16、P27单克隆抗体(1：100)购自福州迈新生物技术开发有限公司，异硫氰酸荧光素(F1TC)羊抗鼠IgG(1：400)购自北京华美生物技术开发有限公司，流式细胞仪为美国BD公司FACS420型。

 1.4 实验方法。

 1.4.1 取样。稳定组在治疗4个周期后经影像学和实体瘤疗效评价达稳定时，抽血；进展组经影像学和实体瘤疗效评价为进展时，抽血。在清晨、空腹、静卧条件下,取外周血2mL,注入盛有0.01mL0.1%乙二胺四乙酸二钠抗凝剂的试管中混匀。

 1.4.2 实验步骤。取抗凝外周血2ml，用国产淋巴细胞分离液分离人抗凝外周血中的淋巴细胞，用PBS洗涤，洗涤后用70%乙醇固定过夜。离心去除乙醇，用PBS洗涤，调节细胞浓度为1×106/ml。穿透，加入一抗(使用鼠抗人cyclinD1、P16、P27单克隆抗体)、二抗(FTTC-IgG抗体)，加入1mlPBS缓冲液，并设同型阴性对照.样品放在0~4℃环境中.准备上机检测。l5mW氩离子激光.激光波长488nm。用CellGuest软件自动取每个样品×104个细胞并分析结果，记录样品的荧光指数(FI值)。

 1.5 统计方法。用SPSS13.0软件包进行统计学处理，实验数据计量资料以(X±S)表示，进行正态及方差齐性检验，结果采用两独立样本t检验，计数资料的比较采用卡方检验，p0.05)。

 2.3外周血淋巴细胞中cyclinD1、P16、P27表达水平的相关性分析采用Pearson相关分析cyclinD1、P16、P27各指标的相关性，见表4。

 表4的结果示：外周血淋巴细胞cyclinD1、P16之间成正相关，相关系数为0.73(p0.05)。

 2.4 疾病病情认知的多因素分析。对以上判断疾病病情有意义的单因素进一步做Logistic回归分析，筛选最能预测疾病病情的因素，见表5

 表5的结果示：cyclinD1进入回归方程，cyclinD1对疾病病情的判断有统计学意义(p0.05)。

 3 讨论

 随着对细胞周期调控认识的不断深入，出现了“癌症可能是一类细胞周期疾病(cellcycledisease)”的观点[2]。近来的研究已表明，细胞周期调节失控是肿瘤发生、发展中重要的分子事件[3]。

 任何因素导致细胞周期中的正负调节因子：细胞周期蛋白(cyclin)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(CKI)失去平衡，出现cyclin过表达或CKI失表达、失活均可能引起细胞增殖失控产生肿瘤 ......