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  [摘要] 目的 为了提高乙肝表面抗原免疫学检测的准确度。方法 研究中采用酶联吸附法(ELISA)和胶体层析法(GICA)，提出方法控制、程序控制、仪器和设备控制以及人员控制四项质量控制措施。结果 ELISA法要比GICA法的灵敏度要高,ELISA正确率较高,GICA正确率稍低。结论 ELISA法技术可靠,准确率较高,是大多数医院常用的检测乙肝表面抗原的免疫学检测方法。

 [关键词] 免疫学检测； 酶联吸附法； 胶体层析法； 质量控制

 [中图分类号] R446.6 [文献标识码] A [文章编号] 1005-0515(2011)-05-291-01

 乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒所引起的世界范围的传染性疾病,其包膜蛋白乙肝表面抗原(Hepatitis B surface antigen,HBsAg)是感染HBV的重要标志。超过20亿的人曾经感染过乙肝病毒(HBV)。其中有3.5亿是慢性持续感染,每年超过100万的慢性乙肝携带者死于肝硬化或肝癌[1]。

 由于乙肝感染病毒的诊断主要依赖免疫学检测指标,因此检测结果的准确性,无论对于疾病防治还是对于告知患者来说,都是非常重要的。所以要通过严格的质量控制,来确保检测结果的准确度。

 1 实验材料和方法

 1.1 质控血清由检测中心提供。

 1.2 研究中所用的乙肝抗原免疫学检测方法是酶联吸附法(ELISA)和胶体层析法(GICA)。

 1.3 试剂与仪器:HBsAg ELISA试剂盒(英科新创(厦门)科技有限公司);HBsAg试纸条(北京万泰生物药业股份有限公司);洗板机(安图Fuido型);全自动酶标仪(安图Autobio2010型)。

 2 结果与讨论

 2.1 结果:两种方法的血清的s/co的均数( )及变异系数(CV)及检验结果(见表1)。

 表1 HBsAg免疫学检测结果

 2.2 分析：

 2.2.1 质量控制的方法对比分析:两种方法相比,在ELISA法中,抗原的扩散在固相表面与抗体的结合以及抗体-抗原-标记抗体复合物的形成都需要相当长的时间,所以检测抗原的时间较长。而GICA得测定时间则比较短。但会造成弱阳性抗原的漏检。从(表中结果可以看出),ELISA法要比GICA法的灵敏度要高,ELISA正确率较高,GICA正确率稍低。因此,乙肝表面抗原免疫学检测的质量与检测的方法密切相关。质量控制首先要从检测方法上进行控制。抗原在进行免疫学检测时,选用技术成熟、检测质量较高的方法,而不是检测时间较短的来进行检测。本研究中所用的ELISA法技术可靠,准确率较高,是大多数医院常用的检测乙肝表面抗原的免疫学检测方法。虽然HBsAg检测的新技术(像化学发光法、时间分辨免疫荧光法、PCR[2]等)不断出现,但该法作为一项成熟可靠的检测乙肝表面抗原的免疫学技术,随着检测灵敏度和特异性的较大提高,该技术仍然是检测中常用的首选技术。

 2.2.2 ELISA法检测质量控制分析:ELISA法在检测的过程中,如果时间不够,就会出现假阴性现象,降低阳性检出率。除此以外,还会受到反应温度、洗板方式和次数、血清分离、试剂量等因素影响。由于影响因素众多,导致任何环节出错,都有可能影响检测结果,给临床诊断带来不同的诊断结果。因此,必须要对该方法进行严格的质量控制,以避免出现诊断错误,给社会和患者造成不必要的经济损失。

 2.2.2.1 从(表中结果分析),对于批号3所对应的数( )较小,而CV却较大。分析造成结果的主要原因有:①操作程序不规范。血清的分离效果不理想、反应的温度过高和过低,反应时间过长或偏短、洗板次数的过多,都会导致测量结果的不准确; ②仪器设备的质量标准不够。本研究中的洗板机管道堵孔,加样器不准、试剂盒质量较差等,都会导致准确度的降低,质量控制的不准确; ③实验人员技术不熟练。本研究中,由于人员短缺,导致个别实验人员的技术不过关而造成测量结果的不准确。这些原因对结果的影响,也是乙肝表面抗原免疫学检测的主要的问题。在质量控制中,要重点关注,提高检测结果的可靠性。

 2.2.2.2 用该法进行乙肝表面抗原检测时,如果HBsAg浓度较高,就会有钩状效应(Hook)现象出现假阴性,从而造成漏检和结果的不准确。用免疫放射分析(IRMA)能克服ELISA法产生的钩状效应,还不受ELISA法因标本溶血造成假阳性的影响,而且比ELISA法检测HBsAg灵敏度高[4]。因此,在免疫检测的质量控制时,病人住院和输血前改用IRMA法做HBsAg检查,以提高检测的准确性。

 2.3 乙肝表面抗原免疫学检测的质量控制

 2.3.1 方法控制。根据具体的情况,选择成熟的和先进的检测方法,提高检测的准确率,是质量控制中最关键和首要的控制条件。

 2.3.2 程序控制。根据选择的方法,严格按照操作程序进行操作,是质量控制的关键步骤。

 2.3.3 仪器和设备控制。选择高质量和高标准的仪器和设备,是提高检测准确性的重要内容。

 2.3.4 人员控制。检测中由专业的检测人员和熟练技术人员进行操作,是提高准确性的有益补充。

 3 讨论 ELISA 技术是利用酶的高效催化和放大作用与特异性抗原- 抗体反应相结合而建立的一种标记免疫技术,因而具有高度的特异性和敏感性。GICA技术是以膜为载体的酶免疫测定技术[5],该法操作极其简便,反应时间短,无需特殊设备,从本次研究结果表明与ELISA 法检测结果差异无统计学意义。从本次研究比较来看,也表明 GICA 法敏感性不及ELISA 法,假阴性率偏高, 不适用于病例的确诊和献血员的筛选,以免造成漏诊和血源性乙型肝炎病毒播散,导致严重后果。因此，ELISA法技术可靠,准确率较高,是大多数医院常用的检测乙肝表面抗原的免疫学检测方法。

 参考文献

 [1] Schoehetman C, Kuhns MC ......