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  【摘要】目的 通过研究HBV宫内感染组与未感染组之孕妇血清HBV含载量(HBV-DNA)、IL-18结合蛋白(IL-18BP)分泌水平及外周血单个核细胞IL-18结合蛋白RNA(IL-18BPmRNA)表达水平的差异，探讨IL-18结合蛋白、IL-18结合蛋白mRNA与HBV宫内感染的相关性及其临床意义。方法 选择2010年1月至2010年12月在我院分娩，患乙肝大三阳的单胎足月妊娠孕妇，检测其新生儿脐带血HbsAg和HBV-DNA，诊断HBV宫内感染孕妇30例作为研究组，未发生宫内感染孕妇随机抽取60例作为对照组。分别用ELISA定量法及逆转入聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测90例孕妇血清HBV-DNA、IL-18BP水平及外周血单个核细胞IL-l8BPmRNA表达水平。结果 1、HBV宫内感染组孕妇外周血清HBV-DNA较未感染组孕妇显著升高，而外周血清IL-l8BP分泌水平、外周血单个核细胞IL-l8BPmRNA表达水平则显著降低，两组差异有统计学意义(P0.05)。

 1.2 研究方法

 1.2.1 标本采集及保存 采集患乙肝大三阳孕妇空腹外周血3管各3ml，1管用于检测HBV-DNA，2管用自动离心机3000r/min离心30min，分离血清及单个核细胞，置于去RNA酶EP管-80℃液氮中保存，等待检测IL-18BP、IL-18BPmRNA。分娩即刻采集新生儿未注射乙肝免疫球蛋白及乙肝疫苗脐带血2ml，用于测乙肝两对半及HBV-DNA。

 1.2.2 检测方法 (2)新生儿血清乙肝两对半测定：采取ELISA法，试剂由中山生物工程有限公司提供，按说明书操作；(1)孕妇及新生儿血清HBV-DNA检测：用荧光定量PCR法，试剂中山大学达安基因股份有限公司提供，按说明书操作；(3)孕妇血清IL-18结合蛋白测定：试剂由北京天更生物试剂提供，所用Labsystems MK3型酶标仪及可调多道移液器(5～200uL)为芬兰Thermo Labsystems公司产品，DNX-9620电脑洗板机由北京普朗新科技有限公司生产，按说明书操作；(4)孕妇外周血单个核细胞内IL-18 mRNA测定：(i)IL-18BPmRNA提取：RNA提取试剂盒(离心柱)由北京天更生物试剂提供，按说明书操作；(ii)荧光定量PCR的操作步骤：引物设计，查IL-18BPmRNAα基因序列：NM_173042，引物设计如下：hIL-18bpF CTGGGCAATGGTTCCTTCA；hIL-18bpR CTGTTCAGGGTCCACGAGC(171bp)，引物探针由韩国 BioNeer公司提供；反转录反应条件的设置：25℃10分钟 42℃60分钟，85℃5分钟；荧光定量PCR扩增条件的设置：94℃4分钟；94℃20秒 60℃30秒 72℃30秒循环35次，72℃检测信号，荧光定量PCR试剂盒由韩国 BioNeer公司提供，严格按说明书操作。

 1.3 HBV宫内感染诊断标准：新生儿脐带血HBsAg和/或HBV-DNA阳性(HBV-DNA>1.00×103拷贝/ml为阳性)。

 1.4 统计学处理 应用SPSS l1.0软件分析数据，结果以(x±s)表示，用卡方检验、t检验以及spearman相关性分析进行统计学分析。

 2 结果

 2.1 两组病例血清HBV-DNA、IL-18BP水平和PBMC内IL-18BPmRNA的表达水平

 HBV宫内感染组(研究组)孕妇外周血清HBV-DNA水平较未感染组(对照组)孕妇明显升高，而外周血清IL-l8BP分泌水平、外周血单个核细胞IL-l8BPmRNA表达水平则显著降低，两组差异有显著统计学意义(P
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