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  【摘要】目的 探讨p16蛋白在骨肉瘤中的表达及临床意义。方法 应用SP免疫组化法检测P16蛋白在40例骨肉瘤及10例正常骨中的表达，分析P16蛋白表达和骨肉瘤病理分级、临床分期及不同临床病理因素间的关系。结果 p16在骨肉瘤中平均表达为60%，其表达与骨肉瘤的组织学分级、临床分期显著相关(P3年者为高生存组，14例(35%)。随访全部病例。对照研究组选用10例正常骨组织。

 1.2 方法

 免疫组织化学法 将10%福尔马林固定、石蜡包埋的骨肉瘤组织制成4～5μm切片，常规脱蜡，浸入0.01mol/L、pH为6.0的枸橼酸盐缓冲液内，微波炉抗原修复10分钟，温度为92～98℃。用SP法进行免疫组织化学染色。P16试剂盒系北京中杉生物试剂公司提供的Zymed公司产品。

 1.3 结果判定

 P16蛋白免疫组织化学染色阳性反应为棕黄色和(或)棕褐色颗粒，P16蛋白定位于细胞核或(和)细胞浆上，自每张切片选10个高倍视野(×400)观察阳性细胞与细胞总数的比例关系，无表达为阴性(-)；表达≤50%为阳性(+)；>51%为强阳性(++)。

 1.4 统计学处理 P16蛋白表达与骨肉瘤临床病理的关系，应用Pearsonx2 检验进行统计学分析，以中位数将P16染色结果分为高表达与低表达两组，统计两组骨肉瘤存活期，并行Long-rank 检验。

 2 结果

 2.1 P16 蛋白免疫组化染色结果

 P16 阳性产物呈棕褐色细颗粒状，主要位于胞核，部分可见于胞浆内。阳性细胞呈弥漫或灶性分布。40 例骨肉瘤免疫组化染色结果阴性16 例(40. 00 %) ， 阳性24例(60. 00 %)，见表1。正常骨、骨肉瘤边缘反应性新生骨未见着色。统计学分析，Ⅰ级与Ⅱ级、Ⅰb与Ⅱa间差异具有显著性(P0.05)。

 表 2 P16 蛋白表达与骨肉瘤主要临床病理资料关系

 2.3 P16 蛋白表达与骨肉瘤病人预后的关系

 本组肿瘤P16 蛋白LI 中位数为50.4 % ，以此将骨肉瘤分为高表达组和低表达组，long-rank 检验。Long-rank 检验结果:X2=6.97 ，两者相差显著( P
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